单选题

改良芽胞染色法有下列五个操作步骤,①用接种环取菌样涂布于玻片上,待自然干燥;②加0.5%沙黄水溶液,染1分钟;③通过火焰加热将菌固定于玻片上;④将涂片放入平皿内,片上放两层滤纸,滴加足量的5.00%孔雀绿水溶液。将平皿盖好,放54~56℃条件下,加热30分钟。取出,去滤纸,用自来水冲洗残留孔雀绿溶液;⑤水洗,待干后镜检。正确的排列顺序是()

A. ①②③④⑤
B. ①④③②⑤
C. ①④②③⑤
D. ①③④②⑤
E. ①③②④⑤

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